細(xì)胞計(jì)數(shù)一般用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,按白細(xì)胞計(jì)數(shù)方法進(jìn)行計(jì)數(shù),便于確定細(xì)胞的生活狀況。在細(xì)胞培養(yǎng)工作中,常需要了解細(xì)胞生活狀態(tài)和鑒別細(xì)胞死活,確定細(xì)胞接種濃度和數(shù)量以及了解細(xì)胞存活率和增殖度,如用酶消化制備的細(xì)胞懸液中細(xì)胞活力的鑒別,凍存細(xì)胞復(fù)蘇后的活力檢測(cè)等。
細(xì)胞懸液制備后,常用活體染料臺(tái)盼藍(lán)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。臺(tái)盼藍(lán)不能透過活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜,故活細(xì)胞不著色。而死亡細(xì)胞的細(xì)胞膜通透性增高,可使染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而使細(xì)胞著色(藍(lán)色)。
細(xì)胞懸液細(xì)胞數(shù)/ml=4個(gè)大格細(xì)胞總數(shù)/4×10,000。如計(jì)數(shù)前已稀釋,可再乘稀釋倍數(shù)。
計(jì)數(shù)時(shí),只計(jì)數(shù)完整的細(xì)胞,若聚成一團(tuán)的細(xì)胞則按一個(gè)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。在一個(gè)大方格中,如果有細(xì)胞位于線上,一般計(jì)下線細(xì)胞不計(jì)上線細(xì)胞,計(jì)左線細(xì)胞不計(jì)右線細(xì)胞。二次重復(fù)計(jì)數(shù)誤差不應(yīng)超過±5%。鏡下觀察,凡折光性強(qiáng)而不著色者為活細(xì)胞,染上藍(lán)色者為死細(xì)胞。
注意事項(xiàng):
1.務(wù)必使分散成單個(gè)細(xì)胞,取樣計(jì)數(shù)前,充分混勻細(xì)胞懸液。
2.顯微鏡下計(jì)數(shù)時(shí),遇到2個(gè)以上細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán),應(yīng)按單個(gè)細(xì)胞計(jì)算。如果細(xì)胞團(tuán)>10%,說明細(xì)胞分散不充分。
3.置顯微鏡下計(jì)數(shù)四角大方格內(nèi)的細(xì)胞總數(shù)。對(duì)于壓線的細(xì)胞只計(jì)數(shù)在上線和左線者,對(duì)于細(xì)胞團(tuán)按單個(gè)細(xì)胞計(jì)數(shù)。